SSIAllchrom 6000型柱后衍生系统
2020版中国药典应用举例---伏格列波糖
目的：使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系统，考察柱后衍生制冷反应器对伏格列波糖峰柱后衍生化HPLC检测影响，提高测试伏格列波糖的灵敏度，为伏格列波糖检测条件的优化提供依据，确
定柱后衍生系统稳定性。
结果：在实验考察条件下，使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系统的峰面积比国家药品标准规定的反
应管灵敏度高。伏格列波糖在含量测定时，20~100μg/mL范围内呈线性，R2为0.9995（n=5）。
其系统适应性的RSD为0.24（n=6）。
结论：SSIAllchrom 6000型柱后衍生带制冷反应器系统测试伏格列波糖操作简便、准确、重现性好，
适用于该品种的质量控制。
1.色谱条件
色谱柱：Apollo C18柱（4.6*250mm，5μ）；柱温35℃；，流速0.8mL /min；检测波长：激发波长为350nm，
发射波长为430nm，柱后衍生；衍生试剂溶液（取牛磺酸6.25g与高碘酸钠2.56g，加水溶解并稀释至
1000mL），反应温度100℃，冷却温度15℃，衍生试剂流速0.8mL /min。磷酸盐缓冲液（pH3.5）：取磷酸
二氢钠二水合物3.12g，加水1000mL使溶解，用磷酸调节pH至3.5±0.1。
2.衍生条件的考察
参考文献及国家药品标准，伏格列波糖反应浴温度为100℃，聚四氟乙烯反应管长20m（内径0.5mm），冷
却浴温度为15℃，聚四氟乙烯冷却管长2m（内径0.3mm）。SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系统不但能够满
足普通PCR的制热性能，同时还增加了制冷反应器。使用SSI/Allchrom 6000型柱后衍生系统测试伏格列波
糖时省去了使用冷却浴操作复杂、温度差别大的缺点，提高了色谱峰的灵敏度和重复性。
本试验将荧光检测器的PMT增益分别设置为600、700、800、900和100，对荧光检测器的PMT增益进行
了选择，结果表明PMT为800时，信噪比高，但是增大了PMT的同时也损耗了荧光检测寿命，建议根据实
验时的自身要求合理选择PMT。
3.含量测定
流动相：0.045%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）：甲醇=90:10
供试品制备：取本品10片，研细，置于50mL容量瓶中，加0.045%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）40mL，
充分振摇30分钟，使伏格列波糖溶解，用0.045%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）稀释至刻度，摇匀，
放置，取上清液经0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
对照品制备：精密称取伏格列波糖对照品20mg，至100mL容量瓶中，加0.045%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液
（pH3.5）释至刻度，摇匀；精密量取对照品溶液1、2、3、4与5mL，分别置于10mL容量瓶中，用0.045%
辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）稀释至刻录，摇匀。
进样量：50μL
3.1线性试验
试验结果标明，以对照品溶液浓度C（μg/mL）对峰面积A回归，得回归方程；A=7567.6C-3117.3，
R2=0.9995（n=5），伏格列波糖浓度在20~100μg/mL范围内与其峰面积呈良好线性关系。
3.2精密度试验
取浓度为40mg/mL的对照品溶液，连续进样6次，其峰面积的RSD为0.24%，保留时间的RSD为0.12%。
3.3样品测定
按上述测定方法测定2批样品，结果如下：
4.有关物质测定
流动相：0.12%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）：甲醇=92:8
供试品制备：取本品10片，精密加0.12%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）10mL，浸泡并时时充分振摇
30分钟，使伏格列波糖溶解，放置，取上清液经0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
对照品制备：精密量取1mL供试品溶液，用0.12%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液（pH3.5）稀释至50mL，作为
对照品溶液。
进样量：200μL
4.1精密度试验
取对照品溶液，连续进样6次，其峰面积的RSD为1.60%，保留时间的RSD为0.35%；
4.2样品测定
按上述测定方法测定2批样品，结果见含量样品测定表。
使用SSIAllchrom 6000型柱后衍生测试伏格列波糖对照品，具有温度稳定快，流速准确的
特点，增加了制冷反应器后，测试伏格列波糖时操作简便，峰面积和保留时间精密度高，线性
关系良好。连续测试5天，色谱峰的数据重复性优良。
